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野生型秀丽隐杆线虫N2(Caenorhabditis elegans N2)是生物学研究中应用最广泛的模式生物之一,具有以下核心特性:
1. 基础生物学特性
体型与透明度:体长约1毫米,通体透明,便于活体观察内部结构。
生命周期短:成虫寿命约2-3周,发育周期仅3-4天,适合快速实验迭代。
繁殖方式:雌雄同体(XX)可自体受精,雄性(XO)存在时也可杂交,繁殖效率高(单条雌雄同体可产约300个后代)。
2. 遗传与基因组优势
基因组清晰:首个完成全基因组测序的多细胞动物,遗传背景明确,基因功能注释完善。
基因保守性:与人类衰老、代谢等通路基因高度同源(如DAF-16/FOXO、SKN-1/Nrf2)。
3. 实验操作便利性
易培养:以大肠杆菌OP50为食,可在标准NGM培养基上大规模培养。
耐受性强:在不利条件下可进入休眠状态(Dauer阶段),适应环境变化。
4. 研究应用特性
运动行为可量化:通过蠕动、爬行等运动模式,可精确测量速度、摆动频率等参数。
多领域模型:广泛用于衰老、神经退行性疾病(如阿尔茨海默病)、代谢调控等研究。
5. 特殊生理结构
神经系统:雌雄同体含302个神经元,神经环路清晰,适合神经科学研究。
消化系统:咽部为神经-肌肉泵,肠道颗粒具荧光特性,便于观察代谢过程。
培养方法:
一、材料准备
培养基配制
NGM培养基(200mL体系)
基础成分:琼脂粉4.0g(凝固剂)、蛋白胨0.5g(氮源)、NaCl 0.6g(渗透压调节)
微量元素:1mol/L MgSO₄ 200μL、CaCl₂ 200μL(离子平衡)
缓冲系统:pH6.0磷酸氢钾缓冲液3.25mL(维持酸碱度)
生长因子:5mg/mL胆固醇乙醇溶液200μL(膜结构合成)
定容:加蒸馏水至200mL后121℃灭菌20分钟
LB培养基:用于OP50大肠杆菌扩增(配方参照标准分子生物学手册)
仪器工具
无菌操作类:铂金丝挑虫针(直径0.3mm)、90mm无菌培养皿
环境控制类:恒温培养箱(精度±0.5℃)、二级生物安全超净工作台
二、OP50大肠杆菌制备
液体扩增:接种单克隆OP50至5mL LB培养基,37℃ 200rpm振荡培养16小时(OD600≈3.0)
平板制备:取对数期菌液100μL,用无菌涂布棒在NGM平板表面均匀涂布,室温干燥30分钟后使用
三、线虫培养标准化流程
接种操作
选择发育一致的L4期线虫(体长≥800μm),使用火焰灭菌的挑虫针转移50±5条至接种区
培养参数
温度控制:20.0±1.0℃恒温培养(温度波动影响生命周期时长)
培养周期:72-96小时可完成卵→成虫的完整发育(需每日观察)
四、关键技术要点
种群同步化:采用碱性次氯酸钠法消化孕成虫,收集同步化虫卵(误差<2小时)
无菌控制:
操作前用75%乙醇擦拭生物安全柜台面
每批次平板需做阴性对照(未接种OP50的NGM平板)
冻存保护:混合等体积30%灭菌甘油与线虫悬液,程序降温后置于-80℃长期保存
五、异常情况处理
线虫逃逸:优先采用NGM琼脂块转移法,避免机械损伤
细菌过度消耗:当OP50菌苔出现透明环(消耗直径>3cm)时应立即传代
六、实验应用规范
寿命分析:
每日09:00定时转移,记录运动消失+咽泵停止作为死亡标准
生殖力检测:
单条成虫24小时产卵量统计需控制食物浓度(OP50 OD600=1.0)
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